近日，中國農(nóng)業(yè)科學院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標準檢測技術(shù)研究所畜產(chǎn)品質(zhì)量安全創(chuàng)新團隊圍繞高值乳品鑒別開發(fā)了一系列快速、定量和多重檢測方法，為高值乳品市場監(jiān)管提供了技術(shù)支撐。
相關(guān)研究成果發(fā)表在《食品化學（Food Chemistry）》等期刊上。該項研究得到“十三五”國家重點研發(fā)計劃等項目資助。
據(jù)介紹，近年來，隨著我國乳制品行業(yè)的快速發(fā)展，市場上出現(xiàn)了許多高值乳品，如山羊奶、牦牛奶、駱駝奶、馬奶、A2牛奶等。這些高值乳品有著更豐富的營養(yǎng)元素、獨特的風味以及保健作用等。因此，開發(fā)高值乳品鑒別方法對于保護消費者權(quán)益、保障人民生命健康十分必要。
針對不同物種乳品的現(xiàn)場快速鑒別需求，針對線粒體種屬特異性基因設計擴增引物，創(chuàng)新團隊開發(fā)了牦牛奶等重組酶聚合酶-核酸試紙條快速檢測技術(shù)，該方法無需PCR等復雜儀器，只需要簡單水浴或體溫加熱即可完成，配合團隊開發(fā)的乳品DNA快速提取方法，可以在40分鐘內(nèi)完成牦牛奶的鑒定。同時為了符合農(nóng)業(yè)領域檢測低成本的要求，團隊設計了基于C3終止加尾引物，避免了現(xiàn)有核酸試紙條技術(shù)中昂貴抗原抗體的使用，同時還提高了檢測效率。
為了解決液態(tài)奶樣品摻假定量檢測的問題，團隊開發(fā)了基于單拷貝核基因作為標志物，利用特異性基因與參考基因熒光定量PCR檢測的Ct值之比，推斷液態(tài)奶樣品中待檢牛奶占總牛奶的含量，分別建立了驢奶、駱駝奶的含量測定方法。該方法無需預先知道摻假乳品種類，一次分析即可確定高值奶的純度，避免傳統(tǒng)PCR方法因為沾染可能造成誤判的現(xiàn)象，也為根據(jù)摻假程度進行合理執(zhí)法提供了技術(shù)依據(jù)。
圍繞高值奶多重鑒別，團隊還開發(fā)了基于實時熒光LAMP技術(shù)的微流控芯片產(chǎn)品。通過提前將各物種奶環(huán)介導等溫擴增引物固定到芯片上，檢測時只需要把提取DNA加到芯片上，通過上機檢測，可在90分鐘完成多個樣品多個指標的同時檢測。
此外，圍繞乳企A2奶牛選育和市場A2乳品鑒別的需求，團隊針對CSN基因突變位點，設計一對可以分別特異擴增A2和A1基因的PCR引物，同時設計了牛內(nèi)參引物作為方法質(zhì)控對照，利用ARMS-PCR技術(shù)，成功開發(fā)了A2奶牛鑒定和A2牛奶鑒別的熒光定量PCR試劑盒。
(單位：中國農(nóng)業(yè)科學院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標準檢測技術(shù)研究所 )
相關(guān)研究成果發(fā)表在《食品化學（Food Chemistry）》等期刊上。該項研究得到“十三五”國家重點研發(fā)計劃等項目資助。
據(jù)介紹，近年來，隨著我國乳制品行業(yè)的快速發(fā)展，市場上出現(xiàn)了許多高值乳品，如山羊奶、牦牛奶、駱駝奶、馬奶、A2牛奶等。這些高值乳品有著更豐富的營養(yǎng)元素、獨特的風味以及保健作用等。因此，開發(fā)高值乳品鑒別方法對于保護消費者權(quán)益、保障人民生命健康十分必要。
針對不同物種乳品的現(xiàn)場快速鑒別需求，針對線粒體種屬特異性基因設計擴增引物，創(chuàng)新團隊開發(fā)了牦牛奶等重組酶聚合酶-核酸試紙條快速檢測技術(shù)，該方法無需PCR等復雜儀器，只需要簡單水浴或體溫加熱即可完成，配合團隊開發(fā)的乳品DNA快速提取方法，可以在40分鐘內(nèi)完成牦牛奶的鑒定。同時為了符合農(nóng)業(yè)領域檢測低成本的要求，團隊設計了基于C3終止加尾引物，避免了現(xiàn)有核酸試紙條技術(shù)中昂貴抗原抗體的使用，同時還提高了檢測效率。
為了解決液態(tài)奶樣品摻假定量檢測的問題，團隊開發(fā)了基于單拷貝核基因作為標志物，利用特異性基因與參考基因熒光定量PCR檢測的Ct值之比，推斷液態(tài)奶樣品中待檢牛奶占總牛奶的含量，分別建立了驢奶、駱駝奶的含量測定方法。該方法無需預先知道摻假乳品種類，一次分析即可確定高值奶的純度，避免傳統(tǒng)PCR方法因為沾染可能造成誤判的現(xiàn)象，也為根據(jù)摻假程度進行合理執(zhí)法提供了技術(shù)依據(jù)。
圍繞高值奶多重鑒別，團隊還開發(fā)了基于實時熒光LAMP技術(shù)的微流控芯片產(chǎn)品。通過提前將各物種奶環(huán)介導等溫擴增引物固定到芯片上，檢測時只需要把提取DNA加到芯片上，通過上機檢測，可在90分鐘完成多個樣品多個指標的同時檢測。
此外，圍繞乳企A2奶牛選育和市場A2乳品鑒別的需求，團隊針對CSN基因突變位點，設計一對可以分別特異擴增A2和A1基因的PCR引物，同時設計了牛內(nèi)參引物作為方法質(zhì)控對照，利用ARMS-PCR技術(shù)，成功開發(fā)了A2奶牛鑒定和A2牛奶鑒別的熒光定量PCR試劑盒。
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